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Part3——Denovo FCS Express6 試用版使用指南-入門篇(中)

作者:admin信息來源:達科為日期:2017年12月11日打印字體:  
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      大家對小達君上周介紹的Denovo FCS Express6的入門篇(上)是否還有印象?今天,小達君給大家介紹軟件的入門知識中篇,請結(jié)合入門篇上篇學(xué)習(xí)喲。

    

       在入門篇上篇中,我們分享了軟件的版面知識,數(shù)據(jù)的添加,圈門,座標軸標簽的改動等功能,那么本期將給將給大家介紹補償?shù)恼{(diào)節(jié)及應(yīng)用,包括手動調(diào)補償及自動調(diào)補償,實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計及一些實用的小技巧。

1. 手動脫機調(diào)補償及自動調(diào)補償

A. 手動調(diào)補償(一般在僅有樣本管或者自動調(diào)補償后微調(diào)時使用)

打開軟件,插入一個數(shù)據(jù)(示例中為彩點圖),當插入一個圖形后,如需更換數(shù)據(jù)的顯示方式,如想將彩點圖更換為其它圖形(如密度圖等),可選中該圖形,直接按照下述步驟更改。

圈中目的細胞群,拖至空白處形成一個新的圖形,并根據(jù)需要改動橫縱坐標軸的參數(shù)。本示例中以FITC和PE為例,調(diào)節(jié)此兩通道之間的補償。下圖所示,補償未經(jīng)過調(diào)節(jié),F(xiàn)ITC與PE之間有補償。


此時可以手動調(diào)節(jié)兩通道之間的補償,該數(shù)據(jù)為FITC單管,可用PE-FITC調(diào)節(jié)FITC滲漏到PE通道去的熒光。步驟如下圖所示:

出現(xiàn)補償編輯欄,從PE通道中去除FITC的熒光信號,使PE通道的Mean/Median值與陰性細胞群一致。

點擊OK,則FITC滲漏到PE通道的熒光被扣除。

B. 自動調(diào)補償(需要陰性管及各單陽管)

    打開軟件,按照下述步驟操作。


建立直方圖后,在原本的版面Page 1后面出現(xiàn)Scatter Plot及其它各個單管的Control界面。


接著,在Scatter Plot版面中,將門的位置移至正確的細胞群所在的位置,如下圖所示。


如所示的方形門不能正確的圈出細胞群,可按以下步驟將該門改變?yōu)樽杂尚伍T等。


圈好門之后,選中單管Control版面,按照陰性細胞與陽性細胞的位置調(diào)整Marker門的位置。


依次調(diào)整好各單管Control的Marker門的位置。此處不一一列舉?;氐窖a償界面。此處的3、4適用于使用補償beads調(diào)節(jié)補償?shù)那闆r(由于本次數(shù)據(jù)為細胞,此處不詳細列出,如對此步驟感興趣,可咨詢小達君)


則自動調(diào)補償就完成了。補償矩陣及溢出矩陣就出現(xiàn)在補償欄中。


此時,可點擊保存將此補償下來,以便下次使用?;氐絇age 1,當添加一個未經(jīng)過補償調(diào)節(jié)的數(shù)據(jù)時,將該補償拖過去,則該補償矩陣就被應(yīng)用到數(shù)據(jù)中。


或者通過右鍵-Format-Overlay-Compension將補償應(yīng)用到該數(shù)據(jù)中。如下圖所示:


2. 實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計


選擇右鍵-Statistics,可添加門數(shù)據(jù)及十字門象限數(shù)據(jù)。


本期就先介紹到這里,大家是不是對Denovo軟件有了更進一步的認識?我們會陸續(xù)推出Denovo軟件的功能介紹及流式數(shù)據(jù)分析的技巧,感興趣的同學(xué)可以下載試用哦。

往期精彩回顧

Denovo FCS Express6使用指南-流式數(shù)據(jù)分析入門篇(上);

這個冬天,Denovo陪你處理流式數(shù)據(jù)。


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