l 技術(shù)簡介

荷蘭U-CyTech公司是很早從事無血清ELISPOT檢測技術(shù)研究并且取得卓越成果的公司之一。值得驕傲的是達科為公司也參與了U-CyTech的很大一部分研究工作，獲得了聯(lián)合的知識產(chǎn)權(quán)。達科為公司獲得授權(quán)，于2006年開始在國內(nèi)生產(chǎn)達優(yōu)?無血清培養(yǎng)基。

由于涉及到專利的問題，這里只對無血清ELISPOT檢測技術(shù)作一個簡單的介紹。通俗地說，就是知道血清中維持淋巴細胞活力所必需的成分后（包括營養(yǎng)代謝成分、細胞信號成分和多種生長因子），把它們做成原料，添加到空白培養(yǎng)基中。然后需要反復驗證這些添加成分，保證它們能夠滿足以下三個要求：

2 維持淋巴細胞存活，保持細胞活力和免疫功能狀態(tài)；

2 不會額外刺激陰性細胞額外產(chǎn)生任何一種細胞因子；

2 不會抑制陽性細胞分泌各種細胞因子。

目前，我們同時提供U-CyTech原產(chǎn)的Lympho-Spot?無血清培養(yǎng)基和U-CyTech授權(quán)達科為在國內(nèi)生產(chǎn)的達優(yōu)?無血清培養(yǎng)基。它們的原料來源與質(zhì)控標準完全相同，能獲得同樣出色的檢測結(jié)果。由于物種的差異，部分添加成分在靈長類和嚙齒類之間有差別。U-CyTech公司采取了同時添加的策略，所以生產(chǎn)出的是通用達優(yōu)?無血清培養(yǎng)基；達科為公司采取的是分別添加的策略，所以生產(chǎn)出的是專用達優(yōu)?無血清培養(yǎng)基，分靈長類和嚙齒類兩個品種。詳細的差別見下表。

l 使用方法

達優(yōu)?無血清培養(yǎng)基的目的在于為檢測細胞提供一個不受血清干擾的培養(yǎng)環(huán)境。在細胞洗滌棄上清之后，用Lympho-Spot?無血清培養(yǎng)基重懸。之后做細胞計數(shù)，用Lympho-Spot?稀釋到需要的濃度，加入ELISPOT孔中即可。此外，刺激物好也用Lympho-Spot?溶解和稀釋。

l 無血清ELISPOT檢測的實際效果

達科為公司做了一系列的有、無血清ELISPOT檢測對比試驗，并且在推廣ELISPOT技術(shù)的標準化以及建立ELISPOT檢測的質(zhì)控系統(tǒng)時，都采用了無血清ELISPOT檢測技術(shù)。在所有的實驗中達優(yōu)?都取得了優(yōu)于血清的結(jié)果?？偨Y(jié)起來就是：背景更干凈，信噪比更高，頻率更穩(wěn)定，結(jié)果更真實。下圖5.1是一些實際案例。