一個(gè)好的噬菌體抗體庫需要具備較大的容量和良好的多樣性，如果庫容量較小，則難以獲得高親和力的抗體。那么想要獲得較大庫容和多樣性豐富的噬菌體文庫，有哪些可以優(yōu)化的因素呢？
 

一、選擇高轉(zhuǎn)化效率的大腸桿菌（感受態(tài)細(xì)胞）

噬菌體文庫的庫容會(huì)受大腸桿菌轉(zhuǎn)化效率的限制，選擇高效率的電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞，能有效的增加噬菌體文庫的庫容，另外也可以通過增加轉(zhuǎn)化次數(shù)來累積庫容。在噬菌體展示文庫構(gòu)建過程中，使用比較多的感受態(tài)細(xì)胞有TG1、XL1-Blue、SS320等。

在進(jìn)行轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)時(shí)，要想獲得高的轉(zhuǎn)化效率，質(zhì)粒/連接產(chǎn)物的純度、電轉(zhuǎn)的條件、質(zhì)粒/連接產(chǎn)物的加入量以及操作的規(guī)范性也是需要注意的地方。

詳情可點(diǎn)擊：

https://mp.weixin.qq.com/s/fojfDFMTZvJFJ89DdCI2vw
 

達(dá)科為生物代理的LGC（Lucigen）提供轉(zhuǎn)化效率≧4×10¹⁰ cfu/μg的噬菌體文庫構(gòu)建感受態(tài)細(xì)胞~

申請(qǐng)方式

2、填寫相關(guān)信息，審核通過即可免費(fèi)獲得試用裝?。總€(gè)用戶僅限申請(qǐng)一次，已購買過該產(chǎn)品的用戶不參與此次活動(dòng)）

試用產(chǎn)品信息

高效噬菌體文庫構(gòu)建感受態(tài)——Phage Display ElectroCompetent Cells

• 
  

• 試用裝包含3種電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞【TG1, SS320 (MC1061 F'), ER2738】，每種感受態(tài)各4個(gè)反應(yīng)；

• 1、抗體或多肽噬菌體展示庫構(gòu)建的最佳選擇；

• 2、最高轉(zhuǎn)化效率的TG1感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化效率≧4×10¹⁰ cfu/μg；

• 3、具有琥珀和非琥珀抑制基因的靈活性選擇；

• 4、生成更大的基因文庫，加速研究發(fā)現(xiàn)。

• 
  

更多感受態(tài)細(xì)胞試用裝

二、輔助噬菌體投入量的優(yōu)化及改造

噬菌體擴(kuò)增的最終目的是將噬菌粒中單一拷貝的抗體片段基因通過噬菌體的擴(kuò)增過程變成10-100個(gè)拷貝。不同文庫大小的噬菌體庫在擴(kuò)增過程中需要的擴(kuò)增體積是不一樣的，要想獲得大庫容的噬菌體文庫，以下條件需要提前進(jìn)行計(jì)算評(píng)估。

1、擴(kuò)增過程中含有噬菌粒的大腸桿菌的數(shù)目和體積；

2、對(duì)應(yīng)加入多少輔助噬菌體進(jìn)行有效感染（一般輔助噬菌體和TG1的比值MOI在10-20：1時(shí)能保證所有的TG1被感染上）；

3、擴(kuò)增后加入多少含有噬菌粒的噬菌體進(jìn)行淘選（如果輔助噬菌體的展示效率只有10%，那最后要保證噬菌體抗體庫中每個(gè)抗體有10-100個(gè)抗體拷貝數(shù)的話，輔助噬菌體的投入量就應(yīng)該是文庫大小的100-1000倍）

注：輔助噬菌體在TG1處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)有比較好的感染效率，TG1處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的OD600值在0.4-0.8。（1OD代表的菌濃度為1×10⁹個(gè)/ml）。

另外，我們也可以選擇展示效率較高的輔助噬菌體，比如gIII基因缺失的Hyperphage（Progen, cat#PRHYPE）,它能使得抗體或多肽在噬菌體展示的拷貝數(shù)增多(up to 5 vs. 0.01) ，從而提高淘選的效率。

三、采用體內(nèi)重組技術(shù)進(jìn)一步增加噬菌體文庫的庫容和多樣性

Cre-loxp體內(nèi)重組系統(tǒng)可以有效增大抗體庫的庫容性，并且在對(duì)文庫進(jìn)行的每一輪篩選中，所有的抗體都可以再次進(jìn)行重組，保證了抗體庫的多樣性，因此該技術(shù)也為高容量抗體庫的發(fā)展提供了有利的工具。近期，YUAN DONG[1]等利用CreLoxP重組技術(shù)構(gòu)建了人源的scFv噬菌體文庫，并對(duì)antiPCSK9抗體進(jìn)行了篩選。

參考文獻(xiàn)

[1] YUAN DONG, FANWEI MENG,et.al. Construction and application of a human scFv phage display library based on CreLoxP recombination for antiPCSK9 antibody selection. INTERNATIONAL JOURNAL OF MOlecular medicine 47: 708-718, 2021.

Lucigen（美國）公司成立于1998年，提供各類用于分子生物學(xué)研究相關(guān)產(chǎn)品，可以使研究者成功克隆較難克隆的基因。2017年Lucigen成為Epicentre Technologies基因組試劑盒、酶和輔助試劑的獨(dú)家經(jīng)銷商。2018年該公司被英國LGC收購，統(tǒng)一改名為Biosearch Technologies。目前產(chǎn)品線主要包括：體外轉(zhuǎn)錄、基因克?。˙AC克隆試劑盒）、感受態(tài)細(xì)胞（TG1噬菌體文庫構(gòu)建感受態(tài)）、體外擴(kuò)增、轉(zhuǎn)座子突變、蛋白表達(dá)、核酸提取、BHQ?探針、Stellaris?RNA FISH等。